中/美/歐/日四大藥典溶液顏色檢查規(guī)范

及解決方案

溶液顏色檢查是藥物的物理特性檢查的常規(guī)檢查項(xiàng)，關(guān)于溶液顏色檢查法，各國(guó)藥典均有進(jìn)行描述，其中有一些相同的地方，但是也存在一些差異。下面就通過對(duì)比中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、歐洲藥典及日本藥典中的溶液顏色檢查法，對(duì)各國(guó)的溶液顏色檢查規(guī)范進(jìn)行梳理，方便大家引用參考。

檢查方法：關(guān)于溶液顏色檢查，中國(guó)藥典和美國(guó)藥典均給出了三種方法，歐洲藥典和日本藥典只有目視法。詳見下表。

在上述的溶液顏色檢查方法中，目視法依賴于人眼的主觀觀察，而分光光度法、色差計(jì)法及美國(guó)藥典中的比色法（色差計(jì)法）則是屬于儀器測(cè)量的范疇。

目視法

首先我們來歸納一下四大藥典中目視法當(dāng)中的相似與區(qū)別。

1、比色液顏色體系

從以上各大藥典的比色液的原始溶液的配置情況來看，四大藥典中均選擇了硫酸銅溶液作為藍(lán)色原始溶液、氯化鈷溶液作為紅色原始溶液。四大藥典在黃色原始溶液選擇的化學(xué)試劑有區(qū)別，中國(guó)藥典選用了重鉻酸鉀溶液，而美國(guó)/歐洲/日本藥典均選用三氯化鐵溶液作為黃色原始溶液。

而用作參考用的比色液，中國(guó)藥典中涉及到的比色液的色號(hào)是最多的（共66個(gè)），日本藥典則綜合了歐洲藥典與美國(guó)藥典中的比色液配置方式以及命名方式。

2、測(cè)試方法

在上表格中已經(jīng)給出了四大藥典中的目視法檢查溶液顏色的實(shí)驗(yàn)操作方法，但在對(duì)于評(píng)判結(jié)果的注意事項(xiàng)，中國(guó)藥典和美國(guó)藥典也給出了一些聲明?！吨袊?guó)藥典0901溶液顏色檢查法》章節(jié)中指出：如供試品管呈現(xiàn)的顏色與對(duì)照管的顏色深淺非常接近或色調(diào)不*一致，使目視觀察無法辨別兩者的深淺時(shí)，應(yīng)改用第三法（色差計(jì)法）測(cè)定，并將其測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。美國(guó)藥典<631>COLOR AND ACHROMICITY章節(jié)中指出：Liquids should be compared in matched color-comparison tubes, against a white background. If results are found to vary with illumination, those obtained in natural or artificial daylight are to be considered correct. Instead of visual determination, a suitable instrumental method may be used. （液體應(yīng)在對(duì)應(yīng)的比色管中與白色背景進(jìn)行比較。如果發(fā)現(xiàn)結(jié)果隨照明而變化，則此處認(rèn)為在自然光或人工日光下獲得的結(jié)果是正確的。此時(shí)可以使用合適的儀器方法代替目視法進(jìn)行測(cè)定），即當(dāng)一定條件下的測(cè)試結(jié)果存在爭(zhēng)議時(shí)，應(yīng)使用儀器法對(duì)溶液顏色進(jìn)行測(cè)定。

儀器法

介紹完四大藥典中溶液顏色檢查法中目視法的區(qū)別，接下來我們對(duì)中國(guó)藥典和美國(guó)藥典當(dāng)中溶液顏色檢查的儀器法進(jìn)行分析。

在目視法觀察溶液顏色差異的過程中，人的主觀因素對(duì)決定判定結(jié)果起到了很大的作用，而儀器法則能提供更多的客觀數(shù)據(jù)，以彌補(bǔ)人眼觀察的不足。

其中紫外-可見分光光度法的測(cè)試原理為：當(dāng)光穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，物質(zhì)對(duì)光的吸收程度隨光的波長(zhǎng)不同而變化。

色差計(jì)法的工作原理簡(jiǎn)單地說即是模擬人眼的視覺系統(tǒng)，利用儀器內(nèi)部的模擬積光學(xué)系統(tǒng)，把光譜光度數(shù)據(jù)的三刺激值X、Y、Z進(jìn)行積分而得到顏色的數(shù)學(xué)表達(dá)式，從而計(jì)算出 L*（明度指數(shù)）、a*（色品指數(shù)）、b*（色品指數(shù)）值及對(duì)比色的色差ΔE*。

總結(jié)：

經(jīng)過對(duì)中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、歐洲藥典以及日本藥典中的溶液顏色檢查規(guī)范的梳理，我們可以看到：

1、目視法是這四大藥典中普遍記載的檢查方法，說明這種方法的使用具有普遍性。

2、在中國(guó)藥典和美國(guó)藥典中也明確指：出當(dāng)溶液顏色很相近，目視法難以區(qū)分或辨別時(shí)，應(yīng)采用色差計(jì)法（儀器法）進(jìn)行檢測(cè)，以獲得更加準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果，表明使用儀器測(cè)量溶液顏色可能是一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)。

3、可以注意到如果樣品溶液渾濁、粘度大或者帶有熒光效應(yīng)時(shí)，會(huì)影響到樣品的透射測(cè)量，此時(shí)不適宜于用色差計(jì)法進(jìn)行檢測(cè)，所以在進(jìn)行溶液顏色檢查的時(shí)候，我們應(yīng)選取合適的方法將進(jìn)行檢測(cè)。

另外，由于這四大藥典中的溶液顏色檢查的參考標(biāo)準(zhǔn)不一樣，所以不建議隨便套用?，F(xiàn)在大家是否對(duì)中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、歐洲藥典以及日本藥典中的溶液顏色檢查規(guī)范的異同之處有了明確的把握呢？如有不當(dāng)之處，敬請(qǐng)指正。

解決方案：

上海胤煌科技針對(duì)藥劑的溶液顏色檢查推出了下列產(chǎn)品：

1、Qz-82a溶液顏色檢查專用傘棚燈

此溶液顏色檢查專用傘棚燈是專門針對(duì)于目視法溶液顏色檢查推出的設(shè)備，擁有日光型COB集成LED光源，在完成溶液顏色檢查的同時(shí)，可以減少光源對(duì)眼睛的刺激。另外，此儀器可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)水平角度和垂直角度的溶液觀察，能有效簡(jiǎn)化操作，更快得到對(duì)比結(jié)果。

2、YH-COS-0101溶液顏色檢查分析儀

此儀器采用D65組合LED光源對(duì)液體溶劑進(jìn)行透射式測(cè)量，儀器不僅具有傳統(tǒng)的色度色差測(cè)量，同時(shí)內(nèi)置中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)比色液庫(kù)，可以選配歐洲藥典或美國(guó)藥典比色數(shù)據(jù)庫(kù)，可以直接測(cè)量出待測(cè)溶液的色號(hào)。

參考文獻(xiàn)：

1、 中國(guó)藥典（2020版）

2、 美國(guó)藥典（40版）

3、 歐洲藥典（10.0版）

4、 日本藥典（17版）

附：四國(guó)藥典中的比色液配置方法

為了方便參考，以下給出各國(guó)藥典的比色液的配置方法：

中國(guó)藥典：

比色用重鉻酸鉀液 精密稱取在120 °C 干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0.4000 g，置500 ml量瓶中，加適量水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。每l ml溶液中含0.800 mg的K₂Cr₂O₇。

比色用硫酸銅液 取硫酸銅約32.5 g，加適量的鹽酸溶液(1-40)使溶解成500 ml，精密量取10 ml，置碘量瓶中，加水50 ml、醋酸 4 ml與碘化鉀2 g，用硫代硫酸鈉滴定液(0.l mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液2 ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失。每   l ml硫代硫酸鈉滴定液(0.l mol/L)相當(dāng)于24.97 mg的CuS0₄·5H₂O。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，在剩余的原溶液中加適量的鹽酸溶液(1-40)，使每l ml溶液中含62.4 mg 的    CuS0₄·5H₂O，即得。
  比色用氯化鈷液 取氯化鈷約32.5 g，加適量的鹽酸溶液(1-40)使溶解成500 ml，精密量取2 ml，置錐形瓶中，加水200 ml，搖勻，加氨試液至溶液由淺紅色轉(zhuǎn)變至綠色后，加醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH 6.0)10 ml，加熱至60 °C，再加二甲酚橙指示液5滴，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液 (0.05 mol/L)滴定至溶液顯黃色。每 l ml乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于11.90 mg 的 CoCl₂·6H₂O。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，在剩余的原溶液中加適量的鹽酸溶液（1-40)，使每l ml溶液中含59.5 mg的CoCl₂·6H₂O，即得。

各種色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 按表 1 精密量取比色用氯化鈷液、比色用重鉻酸鉀液、比色用硫酸銅液與水，混合搖勻，即得。

各種色調(diào)色號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的制備 按表2精密量取各色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液與水，混合搖勻，即得。

美國(guó)藥典：

氯化鈷比色溶液：將約65 g六水合氯化鈷（CoCl₂·6H₂O）溶解在25 mL鹽酸和975 mL水的混合液中，制成1000 mL溶液。用移液管將5 mL該溶液移入250 mL碘瓶中，加入5 mL過氧化氫和15 mL氫氧化鈉溶液（1/5），煮沸10分鐘，冷卻，并加入2 g碘化鉀和20 mL稀硫酸（1/4）。沉淀溶解后，用0.1 N硫代硫酸鈉溶液滴定釋放的碘，加入3 mL淀粉試液作為指示劑。使用相同量的相同試劑進(jìn)行空白組的測(cè)定，并進(jìn)行必要的校正。每毫升0.1 N硫代硫酸鈉溶液相當(dāng)于23.79 mg CoCl₂·6H₂O。通過添加足夠多的鹽酸和水的混合物來調(diào)整溶液的最終體積，使每毫升溶液含有59.5 mg CoCl₂·6H₂O。

硫酸銅比色液：將約65 g硫酸銅（CuSO₄·5H₂O）溶解在25 mL鹽酸和975 mL水的足夠混合物中，制成1000 mL溶液。用移液管將10 mL該溶液移到250 mL碘瓶中，加入40 mL水、4 mL醋酸、3 g碘化鉀和5 mL鹽酸，并用0.1 N硫代硫酸鈉溶液滴定釋放的碘，添加3 mL淀粉試液作為指示劑。使用相同數(shù)量的相同試劑進(jìn)行空白測(cè)定，并進(jìn)行必要的校正。每毫升0.1 N硫代硫酸鈉溶液相當(dāng)于24.97 mg CuSO₄·5H₂O。通過添加足夠的鹽酸和水的混合物來調(diào)整溶液的最終體積，使每毫升溶液含有62.4 mg CuSO₄·5H₂O。

三氯化鐵比色液：將約55 g三氯化鐵（FeCl₃·6H₂O）溶解在25 mL鹽酸和975 mL水的足夠混合物中，制成1000 mL。用移液管將10 mL該溶液移到250 mL碘瓶中，添加15 mL水、3 g碘化鉀和5 mL鹽酸，并使混合物靜置15分鐘。用100 mL水稀釋，用0.1 N硫代硫酸鈉溶液滴定釋放的碘，加入3 mL淀粉作為指示劑。使用相同數(shù)量的相同試劑進(jìn)行空白測(cè)定，并進(jìn)行必要的校正。每毫升0.1 N硫代硫酸鈉溶液相當(dāng)于27.03 mg FeCl₃·6H₂O。通過添加足夠的鹽酸和水的混合物來調(diào)整溶液的最終體積，使每毫升含有45.0 mg FeCl₃·6H₂O。

可根據(jù)附表制備字母標(biāo)識(shí)的流體顏色匹配標(biāo)準(zhǔn)。為制備所需的匹配液體，用移液管將規(guī)定體積的比色試驗(yàn)溶液[參見“試劑、指示劑和溶液"一節(jié)中的“比色溶液（CS）"和水移入其中一個(gè)匹配容器中，并在容器中混合溶液。在前面描述的觀察條件下，按照各專題中的指示進(jìn)行比較。匹配液體或比色溶液的其他組合可在非常低的濃度下使用，以測(cè)量色度偏差。

歐洲藥典

黃色初級(jí)溶液。在約900 mL的鹽酸和975 mL的水中加入4.6 g六水合三氯化鐵，并用相同的混合物稀釋至1000.0 mL。通過添加相同的酸性混合物，滴定并調(diào)整溶液，使其每毫升含有45.0 mg FeCl₃·6H₂O。溶液避免光照。

滴定。將10.0 mL溶液、15 mL水、5 mL鹽酸和4 g碘化鉀放入裝有磨砂玻璃塞的250 mL錐形燒瓶中，關(guān)閉燒瓶，讓其在黑暗中靜置15分鐘，并添加100 mL水。用0.1 M硫代硫酸鈉溶液滴定釋放的碘。5 mL淀粉溶液，在滴定結(jié)束時(shí)加入，作為指示劑。

1 mL 的0.1 M硫代硫酸鈉溶液相當(dāng)于27.03 mg六水合三氯化鐵FeCl₃·6H₂O。

紅色初級(jí)溶液。將60 g二水合氯化鈷溶解在約900 mL的25 mL鹽酸和975 mL水的混合物中，并用相同的混合物稀釋至1000.0 mL。通過添加相同的酸性混合物，滴定并調(diào)整溶液，使其每毫升含有59.5 mg CoCl₂·6H₂O。

滴定。將5.0 mL溶液、5 mL稀釋過氧化氫溶液和10 mL 300 g/L氫氧化鈉溶液放入裝有圓形玻璃塞的250 mL錐形燒瓶中。輕輕煮沸10 min，冷卻后加入60 mL稀硫酸和2 g碘化鉀。關(guān)閉燒瓶，用0.1 M硫代硫酸鈉溶液輕輕搖動(dòng)，溶解沉淀物，使用淀粉溶液，在滴定結(jié)束時(shí)添加，作為指示劑。當(dāng)溶液變成粉紅色時(shí)，即達(dá)到終點(diǎn)。

藍(lán)色初級(jí)溶液。將63 g五水硫酸銅溶解在約900 mL的25 mL鹽酸和975 mL水的混合物中，并用相同的混合物稀釋至1000.0 mL。通過添加相同的酸性混合物，滴定并調(diào)整溶液，使其每毫升含有62.4 mg CuSO₄·5H₂O。

滴定。將10.0 mL溶液、50 mL水、1.2 mL稀醋酸和3g碘化鉀放入裝有磨砂玻璃塞的250 mL錐形燒瓶中。用0.1 M硫代硫酸鈉溶液滴定釋放的碘，使用0.5 mL淀粉溶液，在滴定結(jié)束時(shí)添加，作為指示劑。當(dāng)溶液呈現(xiàn)輕微的淡棕色時(shí)，即達(dá)到終點(diǎn)。

1 mL的0.1 M硫代硫酸鈉溶液相當(dāng)于24.97 mg五水合硫酸銅CuSO₄·5H₂O。

使用3種初始溶液制備5種標(biāo)準(zhǔn)溶液，如下所示（表2.2.2.-1）：

方法1和2的參考溶液：

日本藥典

氯化鈷（II）CS：將65 g六水合氯化鈷溶解在25 mL鹽酸和水中，制成1000 mL。用移液管移取10 mL該溶液，加水精確至250 mL。用移液管移取25 mL溶液，加入75 mL水和50 mg多氯化鈉指示劑，然后滴加稀釋氨溶液（1/10），直到溶液顏色從紅紫色變?yōu)槌赛S色。在接近終點(diǎn)處添加0.2 mL稀釋氨溶液（1/10）后，用0.01 mol/L乙二胺四乙酸二鈉滴定，直到溶液顏色從黃色變?yōu)榧t紫色。

每毫升0.01 mol/L二氫乙二胺四乙酸二鈉相當(dāng)于2.379 mg六水合氯化鈷 CoCl₂·6H₂O。

根據(jù)滴定值，加入稀鹽酸（1/40），制成每毫升含有59.5 mg六水合氯化鈷（II）的溶液，并使用。將溶液儲(chǔ)存在玻璃塞瓶中。

硫酸銅（II）CS：將65 g五水合硫酸銅（II）溶解于25 mL鹽酸和水中，制成1000 mL。移液管取10 mL該溶液，加水至250 mL。移液管取25 mL該溶液，加入75 mL水，10 mL氯化銨溶液（3:50），2 mL稀釋氨溶液（1/10）和50 mg多氯化鈉化指示劑。用0.01 mol/L二氫乙二胺四乙酸二鈉滴定，直到溶液顏色從綠色變?yōu)樽仙?/span>

每1 mL的0.01 mol/L的二氫乙二胺四乙酸二鈉相當(dāng)于2.497 mg的五水合硫酸銅CuSO₄·5H₂O。

根據(jù)滴定值，加入稀鹽酸（1/40），制成每毫升含有62.4 mg五水硫酸銅（II）的溶液，并使用。將溶液儲(chǔ)存在玻璃塞瓶中

氯化鐵（III）CS：將55 g六水合三氯化鐵溶解在25 mL鹽酸和水中，制成1000 mL溶液。用移液管將10 mL該溶液移到碘瓶中，加入15 mL水和3 g碘化鉀，塞緊瓶塞，在黑暗處?kù)o置15分鐘。向混合物中加入100 mL水，并用0.1 mol/L硫代硫酸鈉溶液（相當(dāng)于1 mL淀粉指示劑）滴定游離的碘。

每毫升0.1 mol/L硫代硫酸鈉溶液相當(dāng)于27.03 mg六水合三氯化鐵 FeCl₃·6H₂O。

根據(jù)滴定值，加入稀釋的鹽酸（1/40），制成每毫升含有45.0 mg六水合三氯化鐵（III）的溶液，并使用。將溶液儲(chǔ)存在玻璃塞瓶中。

根據(jù)表2.65-1的指示，使用滴定管或刻度小于0.1 mL的移液管精確測(cè)量三種比色儲(chǔ)備溶液和水的體積，并混合，制備顏色A至T的比色液。將溶液儲(chǔ)存在具塞玻璃瓶中。

對(duì)于B系列（B1至B9）、BY系列（BY1至BY7）、Y系列（Y1至Y7）、GY系列（GY1至GY7）和R系列（R1至R7）的每一種比色液，首先按照表2.65-2的指示，通過混合三種比色儲(chǔ)備溶液來制備單獨(dú)顏色的主要比色液，然后按照表2.65-3中的指示混合相應(yīng)顏色的主要比色液，以制備所需的比色液。